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酶標(biāo)儀的工作原理和應(yīng)用介紹

作者:酶標(biāo)儀    時(shí)間:2023-11-02 13:22:04    點(diǎn)擊次數(shù):625
 

  酶標(biāo)儀(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一種常用的生物化學(xué)分析技術(shù),用于檢測(cè)和定量分析樣品中特定分子的存在和濃度。其工作原理基于酶的催化作用和抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)。

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  酶標(biāo)儀的工作原理如下:


  1. 固相吸附:首先,在酶標(biāo)板或其他固相載體上,將特定抗原或抗體固定下來。這可以通過物理吸附、共價(jià)鍵結(jié)合或特異性親和力來實(shí)現(xiàn)。


  2. 樣品孵育:待測(cè)樣品(如血清、尿液等)與固相載體上的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng),形成特定抗原-抗體復(fù)合物。


  3. 洗滌:通過洗滌步驟去除非特異性結(jié)合的物質(zhì),以減少假陽性信號(hào)。


  4. 酶標(biāo)記物添加:添加與待測(cè)分子特異性結(jié)合的酶標(biāo)記物(如辣根過氧化物酶,HRP),酶標(biāo)記物可以與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。


  5. 反應(yīng)底物:添加適當(dāng)?shù)牡孜?,酶?biāo)記物催化底物的反應(yīng),產(chǎn)生可測(cè)量的信號(hào)。常用的底物有TMB(3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺)或ABTS(2,2'-聯(lián)氨基二乙基-6,6'-二氯苯胺)等。


  6. 反應(yīng)終止:通過添加適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)終止劑,停止底物的反應(yīng)過程。


  7. 讀取結(jié)果:使用酶標(biāo)儀測(cè)量底物反應(yīng)生成的顏色或熒光強(qiáng)度,與待測(cè)物質(zhì)的濃度成正比。


  酶標(biāo)儀的應(yīng)用包括但不限于以下幾個(gè)方面:


  1. 生物醫(yī)學(xué)研究:酶標(biāo)儀可以用于檢測(cè)蛋白質(zhì)、抗體、激素等生物分子,用于疾病機(jī)制的研究、新藥的篩選和藥物代謝的分析等。


  2. 臨床診斷:酶標(biāo)儀可以用于檢測(cè)血清、尿液等樣本中的生物標(biāo)志物,用于疾病的診斷和監(jiān)測(cè),如艾滋病、癌癥、心血管疾病等。


  3. 食品安全:酶標(biāo)儀可以用于檢測(cè)食品中的殘留物、過敏原、致病菌等,保障食品的質(zhì)量和安全。


  4. 環(huán)境監(jiān)測(cè):酶標(biāo)儀可以用于檢測(cè)水體、土壤等環(huán)境樣品中的污染物,如重金屬、有機(jī)物等,有助于評(píng)估環(huán)境質(zhì)量和污染程度。


  總之,酶標(biāo)儀通過酶標(biāo)記物與特定抗原或抗體的結(jié)合反應(yīng),利用酶的催化作用產(chǎn)生可測(cè)量的信號(hào),實(shí)現(xiàn)對(duì)特定分子的檢測(cè)和定量分析。其應(yīng)用廣泛,涵蓋了生物醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷、食品安全和環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。



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