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酶標(biāo)分析儀檢測食物中黃曲霉毒素B1的方法與步驟

作者:admin    時間:2021-06-07 05:40:55    點擊次數(shù):1406
          黃曲霉毒素B1屬于自然界強烈的致癌物質(zhì)之一。 它一般產(chǎn)生于玉米,花生,巴西堅果和棉花種子中。 鑒于這種霉菌毒素的毒性,歐洲 做出了相近的限量,對黃曲霉毒素B1的限量為2ppb,對黃曲霉毒素總量的限量為4ppb。

  使用酶標(biāo)儀能夠快速而準(zhǔn)確的檢測谷物,飼料和其他食品中的黃曲霉毒素B1。

  檢測原理

  黃曲霉毒素B1檢測試劑盒應(yīng)用直接競爭酶聯(lián)免疫吸附原理。

  (1)樣品提取液或黃曲霉B1標(biāo)準(zhǔn)品100ul與酶聯(lián)偶合物200ul,混合后取100ul,

  (2)加入到抗體包被的微孔中等待15分鐘,

  (3)洗板去除未參加抗原-抗體反應(yīng)的黃曲霉毒素B1,

  (4)酶的底物100ul加入到微孔中,等待5分鐘,顏色變?yōu)樗{色,顏色的深淺與黃曲霉毒素B1的含量成反比,

  (5)加入終止液100ul,顏色變?yōu)辄S色,

  檢測步驟

  1.取固體或液體樣品5ml,加入25ml 70%的甲醇,混勻3分鐘,靜止10分鐘,過濾,收集濾液,吸取100ul濾液加100ul分析緩沖液,混勻。

  2.取出綠色的稀釋孔和無色的有抗體包被的稀釋孔各放入一個板架上。

  3.吸取200ul酶聯(lián)偶合物加入到綠色的稀釋孔,再吸取100ul標(biāo)樣(0、2、5、20、50ppb),和100ul步驟1的待檢混合樣,混勻3次。

  4.然后從300ul混合物中吸取100ul加入到無色的有抗體包被的稀釋孔中,靜止15分鐘。

  5.將孔中的液體倒掉,用蒸餾水沖洗每個孔,將微孔倒置于紙巾上把水吸干。

  6. 加入100ul底物,放置5分鐘,顏色變?yōu)樗{色。

  7. 加入100ul終止液,顏色變?yōu)辄S色。

  8. 上機檢測,(酶標(biāo)儀濾鏡450nm,示差濾鏡630nm)

  9. 稀釋倍數(shù)f:1

  10. 定量限:生奶0.002ug/kg,

  11. 牛奶或花生醬≤20ug/kg,合格,

  12. 計算公式:X= c*f

  備注:

  1. 酶聯(lián)偶合物25ml :sensitive conjugate 底物15ml :substrate 終止液15ml :stop solution 分析緩沖液 15ml :assay buffer

  2. 試劑盒在使用前恢復(fù)到室溫(18~30度),使用完畢后,放入2~8度冰箱冷藏

  3. 標(biāo)樣中含有毒素,致癌性,使用時戴好橡膠手套、安全眼鏡、工作服等防護裝備

  4. 在讀數(shù)前,微孔中應(yīng)沒有氣泡,否則影響分析結(jié)果

  5. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù) r ≥0.9850

  6. 嚴(yán)格遵守規(guī)定的操作時間,否則導(dǎo)致數(shù)據(jù)不

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