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酶標儀檢測鈣離子的方法介紹

作者:admin    時間:2021-06-21 01:54:27    點擊次數(shù):1358
          酶標儀主要通過兩種方式檢測鈣離子通路:
     1,熒光方法。
       化合物與細胞膜上的離子通道結(jié)合后,離子通道的狀態(tài)發(fā)生改變,通道被打開,鈣離子進入細胞。進入細胞后,與細胞內(nèi)的鈣離子熒光指示劑結(jié)合,發(fā)出熒光并被酶標儀捕獲。熒光強度與進入細胞的鈣離子含量成正比。熒光指示劑大多是FLuo3。Fluo3-AM是乙酰甲酯的衍生物,可以穿透細胞膜進入細胞。進入細胞后,被細胞內(nèi)酯酶切成氟,留在細胞內(nèi)。鈣離子進入細胞后與它結(jié)合,它發(fā)出強烈的熒光。
     2、發(fā)光的方法。
        A水母發(fā)光蛋白復合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔腸素組成。只有鈣離子(Ca2+)與復合物結(jié)合時,coelenterazine才能被氧化產(chǎn)生高能產(chǎn)物Coelenteramide,同時釋放CO2和藍色熒光(-466 nm)。正是這種Ca2+依賴的反應(yīng)過程(見圖1)使得coelenterazine非常適合監(jiān)測活細胞中的鈣離子水平。
      與傳統(tǒng)的熒光鈣離子指示劑相比,它具有以下優(yōu)點:
      1)、可檢測范圍廣泛的鈣離子濃度-從0.1 μM到>100 μM;
      2)、樣品無自身熒光,且背景熒光低于使用的鈣離子熒光指示劑;雖然信號比熒光鈣離子指示劑弱,但通過成像儀器可以獲得較高的信噪比,因此具有較高的靈敏度。
      3)、丙泊林復合物可以穩(wěn)定地維持在細胞內(nèi),使其能夠監(jiān)測鈣離子數(shù)小時至數(shù)天。

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