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生物儀器中酶標(biāo)儀濾光片的應(yīng)用介紹: 工作原理+用途

作者:超級管理員    時(shí)間:2022-03-16 22:10:04    點(diǎn)擊次數(shù):1297
 

    酶標(biāo)儀(MicroplateReader)是對酶聯(lián)免疫檢測(EIA)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的,反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示,通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測抗體或抗原的濃度。

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    隨著檢測方式的發(fā)展,擁有多種檢測模式的單體臺(tái)式酶標(biāo)儀叫做多功能酶標(biāo)儀,可檢測吸光度(Abs)、熒光強(qiáng)度(FI)、時(shí)間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學(xué)發(fā)光(Lum)。


    酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長范圍內(nèi)的任意波長,而濾光片型酶標(biāo)儀則根據(jù)選配的生化儀干涉濾光片,只能截取特定波長進(jìn)行檢測。


    酶標(biāo)儀工作原理:


    酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值。光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片之后變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔極中的待測標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收,另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào).電信號(hào)經(jīng)前置放大,對數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算,*后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果。


    酶標(biāo)儀濾光片的放置:


    在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣,酶標(biāo)儀濾光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后面,聚光鏡,光欄后到達(dá)反射鏡,經(jīng)反射鏡作90°反射后垂直通過比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到光電管.


    酶標(biāo)儀檢測什么?


    光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。檢測單位用OD值表示, OD是optical density(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度


    檢測結(jié)果的影響因素:


    由于有相當(dāng)多的因素會(huì)影響檢測的結(jié)果,如不同的酶標(biāo)板,檢測試劑的體積,都會(huì)造成OD值的不同,因此,只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。


    酶標(biāo)儀的用途:


    可廣泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braford/Lowry),酶活、酶動(dòng)力學(xué)檢測,酶聯(lián)免疫測定(ELISAs),細(xì)胞增殖與毒性分析,細(xì)胞凋亡檢測(MTT),報(bào)告基因檢測及G蛋白偶聯(lián)受體分析(GPCR)等。


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